每日一读外源性神经生长因子对血肿灶周神

正文

贺丹.外源性神经生长因子对血肿灶周神经元再生的影响[J].中国临床康复,,10(18).

目前，神经元再生已成为世界范围内神经科学研究的热点，基础研究表明神经生长因子、成纤维细胞生长因子和表皮生长因子等具有促进脑损伤后神经元再生的作用。本实验将外源性神经生长因子立体定向导入血肿灶周区，采用免疫荧光双标法，利用先进的激光共聚焦显微镜技术，观察神经生长因子对血肿灶周额叶皮质神经元再生的影响。

方法

健康家犬21只，随机分为3组：神经生长因子组（n=9）：注血后0.5h，将神经生长因子AU立体定向导入血肿灶周区。脑出血对照组（m=6）：只注血，不注药。对照组（n=3）：只进针，不注血和注药。3组动物进入实验程序后前3d进行BrdU标记，在脑出血后3,10,28d三个时间点进行激光共聚焦显微镜检测，观察血肿灶周BrdU荧光单标和BrdU-NSE及BrdU-GFAP荧光双标细胞的数目和所在位置(BrdU为新生神经元的标记物，NSE为成熟神经元的标记物，GFAP为成熟星形胶质细胞的标记物)。

讨论

目前的研究表明，外源性神经干细胞移植和内源性神经干细胞激活是治疗某些中枢神经系统疾病的两大策略。缺血性脑梗死的基础研究表明，神经元再生现象仅局限于脑内某些特定区域，如海马齿状回颗粒层下增生带、前脑室下带和大脑皮质感觉区，但是这些区域仅存在极少量的神经干细胞，正常情况下处于静息状态，当脑内出现某些病理变化（如缺血）或在外界细胞因子的作用下，这些神经干细胞可自身激活（或抑制因子失活），在损伤原位出现或异位增生后向损伤部位迁徙并分化。神经元的再生过程受众多因素的影响，其中内环境中的神经营养因子（如神经生长因子）能够激活来自中枢神经系统不同区域的神经元前体细胞潜在的再生能力，但内源性神经生长因子在脑内含量低微，只有及时补充外源性神经生长因子，才能有效促进神经元再生，从而促进神经系统功能的修复。但额叶皮质是否存在神经干细胞，以及脑出血是否会激活脑内静止的神经干细胞，目前尚未见报道。

BrdU为新生神经元的标记物（核着色，绿色荧光），NSE为成熟神经元的标记物（核着色，红色荧光），GFAP为成熟星形胶质细胞的标记物（浆着色，红色荧光）。BrdU-NSE双标时表现为胞核呈现黄色荧光，表明该神经元是由新生神经元分化而成的成熟神经元，BrdU-GFAP双标时表现为胞核呈绿色荧色，胞浆为红色荧光，表明该神经胶质细胞是由新生神经元分化而成的成熟胶质细胞。此实验表明额叶皮质也存在静止的神经干细胞，在脑出血导致的脑组织损伤信号的刺激和影响下，在提供了外源性神经生长因子的微环境中可以被激活，再生出新生的神经元，新生的神经元可再进一步分化成为成熟的神经元和成熟的神经胶质细胞。神经生长因子组双标细胞的分布多位于血肿靠近额叶皮质面，在皮质与皮质下移行区内可见双标细胞，而脑出血对照组极罕见，说明再生和分化的神经元和神经胶质细胞有向血肿灶周区迁徙的趋势，试图替代和修复血肿灶周神经组织的结构和功能。

本实验结果表明，外源性神经生长因子立体定向导入血肿灶周区，能够通过刺激额叶皮质内源性神经干细胞再生、分化和迁徙的机制来促进血肿灶周神经功能的修复，这将为进一步开展神经生长因子基因疗法治疗脑出血的研究提供客观的实验依据。